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点击次数：165 发布时间：2022/9/7 12:28:47
· 上 传 者： 上海心语生物科技有限公司
· 上传时间：2022/9/7 12:28:47
· 文件大小：114KB
· 文件类型：jpg
· 所属分类：操作维修手册
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· 资料简介： 实验原理 本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中鹅分泌型免疫球蛋白A(sIgA)水平。用纯化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，往包被的微孔中依次加入分泌型免疫球蛋白A(sIgA)，再与HRP标记的抗原结合，形成抗原-抗体-酶标抗原复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的分泌型免疫球蛋白A(sIgA)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中鹅分泌型免疫球蛋白A(sIgA)浓度。 试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml×1瓶 7 终止液 6ml×1瓶 2 酶标试剂 6ml×1瓶 8 标准品（16μg/ml） 0.5ml×1瓶 3 酶标包被板 12孔×8条 9 标准品稀释液 1.5ml×1瓶 4 样品稀释液 6ml×1瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2张 6 显色剂B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。 8μg/ml 5号标准品 150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液 4μg/ml 4号标准品 150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液 2μg/ml 3号标准品 150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液 1μg/ml 2号标准品 150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液 0.5μg/ml 1号标准品 150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液 2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30后弃去，如此重复5次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。 7. 温育：操作同3。 8. 洗涤：操作同5。 9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色10分钟. 10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 11. 测定：以空白孔调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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