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点击次数:2395 发布时间:2015/5/13 22:43:09
人γ谷氨酰转肽酶(GGT)elisa试剂盒操作步骤:
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
400U/L 5 号标准品 150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液
200U/L 4 号标准品 150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
100U/L 3 号标准品 150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
50U/L 2 号标准品 150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
25U/L 1 号标准品 150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl,待测样品孔中先加样品稀释液 40µl,然后再加待测样品10µl(样品*终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此
重复 5 次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50µl,空白孔除外。
7.温育:操作同 3。
8.洗涤:操作同 5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15 分钟.
10.终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色) 。
11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止液后 15 分钟以内进行。
人γ谷氨酰转肽酶(GGT)elisa试剂盒实验原理:
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人γ谷氨酰转肽酶(GGT)水平。用纯化的人γ谷氨酰转肽酶(GGT)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入γ谷氨酰转肽酶(GGT),再与HRP标记的γ谷氨酰转肽酶(GGT)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的γ谷氨酰转肽酶(GGT)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人γ谷氨酰转肽酶(GGT)浓度。
原创作者:上海心语生物科技有限公司