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点击次数:2407 发布时间:2015/4/8 16:25:32
鸡免疫球蛋白G(IgG)elisa试剂盒实验原理:
本试剂盒应用双抗原夹心法测定标本中鸡免疫球蛋白 G(IgG)水平。用纯化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被单抗的微孔中依次加入免疫球蛋白 G(IgG),再与 HRP 标记的抗原结合,形成抗原-抗体-酶标抗原复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成*终的黄色。颜色的深浅和样品中的免疫球蛋白 G(IgG)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中鸡免疫球蛋白 G(IgG)浓度。
鸡免疫球蛋白G(IgG)elisa试剂盒操作步骤:
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
900ng/ml 5 号标准品 150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液
450ng/ml 4 号标准品 150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
225ng/ml 3 号标准品 150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
112.5ng/ml 2 号标准品 150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
56.25ng/ml 1 号标准品 150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、2待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl, 待测样品孔中先加样品稀释液 40µl,然后再加待测样品 10µl(样品*终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用。
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此
重复 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。
7. 温育:操作同 3。
8. 洗涤:操作同 5。
9. 显色:每孔先加入显色剂 A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
10 分钟。
10. 终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色) 。
11. 测定:以空白空调零,450nm 波长依序测量各孔的吸光度(OD 值) 。 测定应在加终止液后 15 分钟以内进行
原创作者:上海心语生物科技有限公司