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点击次数:2243 发布时间:2015/3/30 10:29:34
猪圆环病毒(PCV)elisa试剂盒操作步骤
1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
120ng/L 5 号标准品 150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液
60ng/L 4 号标准品 150µl 的 5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
30ng/L 3 号标准品 150µl 的 4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
15ng/L 2 号标准品 150µl 的 3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
7.5ng/L 1 号标准品 150µl 的 2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液
2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50µl,待测样品孔中先加样品稀释液40µl,然后再加待测样品10µl(样品*终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。
4. 配液:将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用
5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30 秒后弃去,如此
重复 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶标试剂 50µl,空白孔除外。
7. 温育:操作同 3。
8. 洗涤:操作同 5。
9. 显色:每孔先加入显色剂A50µl,再加入显色剂 B50µl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色
15 分钟.
10. 终止:每孔加终止液 50µl,终止反应(此时蓝色立转黄色) 。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
原创作者:上海心语生物科技有限公司